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大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說明書
BS-3177 大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒
以下是關(guān)于大鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說明書，綜合了多個(gè)來源的操作步驟和注意事項(xiàng)：
一、試劑盒組成
預(yù)包被板?：96孔或48孔微孔板，已包被抗Casp-9抗體?。
標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉形式，需用稀釋液復(fù)溶，濃度通常為2000 pg/mL，需倍比稀釋成梯度濃度?。
檢測溶液?：包括生物素標(biāo)記抗體(檢測溶液A)、酶標(biāo)二抗(檢測溶液B)?。
洗滌液?：30倍濃縮液，需用蒸餾水稀釋?。
顯色底物(TMB)與終止液?：避光保存，顯色后需立即終止反應(yīng)?。
二、樣本處理
血清/血漿?：采集后室溫靜置10-20分鐘，離心(2000-3000 rpm，20分鐘)取上清，避免溶血或脂血?。
組織勻漿?：按重量比加入PBS勻漿，離心后取上清，分裝保存于-20℃?。
細(xì)胞上清?：離心去除顆粒，凍存前避免反復(fù)凍融?。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
加樣?：
每孔加入50μL標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本(建議復(fù)孔)，隨后加入50μL生物素標(biāo)記抗體?。
37℃孵育1小時(shí)，洗滌3次(手工操作或洗板機(jī))?。
酶標(biāo)反應(yīng)?：
加入80μL親和鏈酶素-HRP，37℃孵育30分鐘，再次洗滌?。
顯色與終止?：
每孔加入底物A/B各50μL，避光孵育10分鐘，立即加入50μL終止液?。
讀數(shù)?：
使用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度?。
四、注意事項(xiàng)
試劑保存?：未開封試劑盒-20℃保存，開封后酶標(biāo)板需密封防潮，TMB和終止液需4℃避光?。
操作規(guī)范?：避免泡沫產(chǎn)生，加樣時(shí)需精準(zhǔn);洗滌需，防止非特異性結(jié)合?。
質(zhì)量控制?：建議每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白孔和復(fù)孔，標(biāo)準(zhǔn)曲線R值應(yīng)≥0.95?。
樣本要求?：反復(fù)凍融不超過3次，組織樣本需新鮮處理或液氮速凍?。
五、常見問題
顯色異常?：可能因酶標(biāo)抗體失效或洗滌不充分，需檢查試劑有效期和操作步驟?。
背景過高?：封閉不或樣本中干擾物質(zhì)過多，可優(yōu)化封閉液濃度或稀釋樣本?。
注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體操作請以實(shí)際試劑盒說明書為準(zhǔn)或咨詢品牌商?。
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