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elisa試劑盒加入終止液后沒有立即測定影響大嗎?
更新時間:2025-08-12瀏覽:392次

     elisa試劑盒加入終止液后沒有立即測定影響大嗎?

  在ELISA實驗中,加入終止液后未立即測定可能會對結果產生一定影響,具體取決于以下幾個因素:

  1. 終止液的作用

  終止液)的作用是終止酶(如HRP)與底物(如TMB)的反應,使顯色反應停止。一旦終止液加入,顏色會迅速穩定(如TMB從藍色變為黃色)。

  2. 延遲測定的潛在影響

  顏色穩定性:大多數ELISA試劑盒(如TMB底物體系)在終止后顏色可穩定數小時(通常2-4小時,具體參考說明書)。但長時間放置(如超過24小時)可能導致吸光度(OD值)略微下降或背景升高。

  環境因素:如果板子暴露在強光或高溫下,可能加速顏色變化,導致結果偏差。

  特殊底物:某些底物(如OPD)在終止后穩定性較差,需盡快檢測。


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  3. 建議操作

  立即測定最佳:大多數說明書建議終止后10-30分鐘內完成讀數,以確保準確性。

  短期延遲(1-2小時):若無法立即檢測,可將反應板避光保存于室溫(避免低溫導致沉淀),通常影響較小。

  長期延遲:如需長時間保存,建議先讀取數據后再存檔樣本,避免依賴延遲測定。

  4. 驗證方法

  如果不確定影響程度,可進行對比實驗:

  立即測定一組孔,延遲測定另一組(如1小時、2小時后),觀察OD值變化趨勢。

  結論:短時間延遲(如1小時內)通常影響不大,但應盡量按說明書要求操作,避免人為誤差。若延遲較久,需評估試劑盒的穩定性或優化實驗流程。



  注:以上資料僅供參考,如需具體品牌試劑盒的完整說明,可咨詢技術老師或品牌供應商的詳細文檔。

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